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重组梅花鹿来源Cu/Zn-SOD的分离纯化及酶学性质
作者: 许鑫琦 吕橄 李仁宽 叶秀云 林娟
关键词: Cu Zn-SOD 梅花鹿 毕赤酵母 纯化 酶学性质
摘要:超氧化物歧化酶(SOD)能特异性清除氧自由基,对保护细胞免受氧化损伤具有重要作用.本文构建了表达重组梅花鹿来源Cu/Zn-SOD的毕赤酵母工程菌GS115-pPIC9K-SOD,并对重组SOD进行分离纯化和酶学性质研究.通过10 ku中空纤维柱超滤、DEAE弱阴离子交换层析、高效凝胶色谱分离纯化,重组Cu/Zn-SOD的比活力为1 7647.1 U/mg,回收率为36.84%.对重组Cu/Zn-SOD的酶学性质研究表明,其最适反应pH 8.0,最适反应温度30℃;在pH 5~9之间较为稳定,保温1h后仍能保留80%以上的酶活力;60℃保温1h酶活保持在90%以上,70 ℃保温20 min残余酶活力仍有70%以上.重组Cu/Zn-SOD在中性条件下对蛋白酶耐受性较好,然而易受胃酸的酸解导致酶活力丧失.
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