多种绿色DNA嵌入染料实时荧光PCR检测猪DNA效果比较

作者: 杨艳王桂姬周广运任皓威夏秀芳刘宁

关键词: 实时荧光PCR DNA嵌入染料猪DNA

摘要：实时荧光定量PCR是食品科学领域一种高效、灵敏的研究技术,荧光染料的种类和浓度会对实时PCR反应产生一定影响.以8种绿色荧光DNA嵌入染料SYTO 11～14,SYTO 16,SYTO 21,SYTO 24～25为研究对象,体系选择荧光染料浓度分别为10,5,2,1,0.5 μmol/L,以从猪肉中提取的基因组DNA为模板进行扩增,产物长度149bp.通过分析Gt值和熔解曲线,评价染料浓度对扩增效果的影响,初步筛选出最适染料及相应浓度:SYTO 11(5μmol/L,2 μmol/L),SYTO 13(10μmol/L,5μmol/L),SYTO 16(10 μmol/L,5 μmol/L),SYTO 21(1μmol/L)和SYTO 24(0.5μmol/L).根据筛选结果自配反应预混液,以2种商业实时荧光PCR预混液为参照,通过模板10倍梯度稀释绘制标准曲线,计算扩增效率,R2均大于0.99,线性范围均在40 ng～0.04 pg之间,其中染料SYTO 13(10 μmol/L)和SYTO 16(10μmol/L,5 μmol/L)扩增效率分别为99.35％,100.50％和99.71％,接近商业试剂盒2(BYRT染色,扩增效率99.61％),高于商业试剂盒1(Evagreen染色,扩增效率97.80％),具有实际应用价值.

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多种绿色DNA嵌入染料实时荧光PCR检测猪DNA效果比较

作者: 杨艳 王桂姬 周广运 任皓威 夏秀芳 刘宁

关键词: 实时荧光PCR DNA嵌入染料 猪DNA

作者: 杨艳王桂姬周广运任皓威夏秀芳刘宁

关键词: 实时荧光PCR DNA嵌入染料猪DNA